ຫຼັກການຂອງການສັງເຄາະອາຊິດນິວຄລີອິກ

ການສັງເຄາະອາຊິດນິວຄລີອິກແມ່ນດໍາເນີນໂດຍໃຊ້ວິທີການ sialic amide triglyceride ໄລຍະແຂງ, ໂດຍທີ່ 3′ ສິ້ນສຸດຂອງ DNA ໄດ້ຖືກ immobilized ສຸດ substrate ໄລຍະແຂງແລະ nucleotides ໄດ້ຖືກເພີ່ມໃນທິດທາງ 3′ ຫາ 5′ ຈົນກ່ວາຊິ້ນ DNA ທີ່ຕ້ອງການຖືກສັງເຄາະ. .ນີ້ແຕກຕ່າງຈາກການສັງເຄາະ DNA ໂດຍການນໍາໃຊ້ DNA polymerase.

ປາຍ 3′ ຂອງພື້ນຖານທໍາອິດຖືກ immobilized ສຸດ CPG ໃນລະຫວ່າງການສັງເຄາະ, 5′-OH ຂອງຖານຕໍ່ໄປແມ່ນປ້ອງກັນດ້ວຍ di-p-tolyl trityl DMT, ກຸ່ມ amino ເທິງຖານແມ່ນປ້ອງກັນດ້ວຍອາຊິດ benzoic ແລະ 3′. - ຫຼັງຈາກນັ້ນ, OH ຖືກກະຕຸ້ນດ້ວຍສານປະກອບ amino phosphate.1 ຖານຂອງ 5 5′-OH ຂອງ 1 ຖານ ແລະ 3′-OH ຂອງຖານຖັດໄປປະກອບເປັນ phosphite triglyceride, ເຊິ່ງຫຼັງຈາກນັ້ນຖືກ oxidized ດ້ວຍ iodine ກັບ phosphate triglyceride, ປ້ອງກັນໃນຖານທີສອງ 5′-OH ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກໂດຍ ການເພີ່ມອາຊິດ dichloroacetic DM ຮອບວຽນໂດຍຜ່ານການເພີ່ມຂອງຖານຕໍ່ໄປ, ແລະຫຼັງຈາກການສັງເຄາະສານປ້ອງກັນໃນ 5′-OH ໄດ້ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກດ້ວຍອາຊິດອ່ອນແອ, fragment ໄດ້ຖືກຕັດອອກຈາກ resin ແຂງດ້ວຍ ammonium hydroxide ເຂັ້ມຂຸ້ນ, ປ້ອງກັນໄດ້ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກຈາກຖານ. ດ້ວຍ ammonium hydroxide ເຂັ້ມຂຸ້ນພາຍໃຕ້ການໃຫ້ຄວາມຮ້ອນ, ammonium hydroxide ໄດ້ຖືກໂຍກຍ້າຍ, fragment ແມ່ນສູນຍາກາດແຫ້ງ, ແລະອາຊິດ nucleic ໄດ້ຖືກ purified ໂດຍ chromatography ແຫຼວຫຼື PAGE.

ຂັ້ນຕອນຂອງການສັງເຄາະ Oligo

ການຂັດຂວາງ

ໄດ້5 ສິ້ນສຸດກຸ່ມປົກປ້ອງ DMT ຖືກໂຍກຍ້າຍອອກໂດຍການເພີ່ມການແກ້ໄຂ TCA.

ການເປີດໃຊ້ງານ

ການປະສົມຕົວກະຕຸ້ນກັບໂມໂນເມີໂອລິໂກນູຄລີໂອທິດເພື່ອສ້າງເປັນໂມໂນເມີກາງຂອງໂອລິໂກນູຄລີໂອຕິດທີ່ເຄື່ອນໄຫວ.

ການເຊື່ອມ

ກຸ່ມ hydroxyl 5-terminal reacts ກັບ oligonucleotide intermediate ທີ່ມີການເຄື່ອນໄຫວໃນປະຕິກິລິຍາຕ້ານການຜະສົມຜະສານເພື່ອສ້າງເປັນພັນທະບັດ triglyceride phosphite ທີ່ບໍ່ຫມັ້ນຄົງ.

ຝາປິດ 

ການເພີ່ມຂອງຕົວແທນ capping ປະຕິບັດປະຕິກິລິຢາ acetylation capping ກັບກຸ່ມ hydroxyl ເກີນທີ່ບໍ່ມີສ່ວນຮ່ວມໃນປະຕິກິລິຍາ condensation.

Oxidation 

ການຕື່ມຂອງການແກ້ໄຂໄອໂອດິນທີ່ມີນ້ໍາປະຕິກິລິຍາກັບພັນທະບັດ phosphite ທີ່ບໍ່ຫມັ້ນຄົງໂດຍການຜຸພັງເພື່ອສ້າງເປັນພັນທະບັດ triglyceride ອາຊິດ phosphoric ທີ່ຫມັ້ນຄົງ.

Cyanoethyl Cleavage

ຜະລິດຕະພັນອາຊິດນິວຄລີອິກຫຼັງຈາກການສັງເຄາະ, ດ້ວຍການເພີ່ມການແກ້ໄຂ DEA ເພື່ອເອົາກຸ່ມ cyanoethyl ອອກຈາກພັນທະບັດ phosphate triglyceride.

Cleaved & Deprotection

ຊິ້ນສ່ວນອາຊິດນິວຄລີອິກຖືກຕັດອອກຈາກຕົວຂົນສົ່ງໄລຍະແຂງໂດຍການເພີ່ມສານສະກັດຈາກອາໂມນຽມໄຮໂດຣໄຊທີ່ເຂັ້ມຂຸ້ນແລະຫຼັງຈາກນັ້ນໃຫ້ຄວາມຮ້ອນເພື່ອເອົາກຸ່ມປົກປ້ອງອອກຈາກພັນທະບັດໄຮໂດເຈນຂອງຖານ.