ຫຼັກການພື້ນຖານຂອງການສັງເຄາະ DNA

ການສັງເຄາະ DNA ເຄມີແມ່ນອີງໃສ່ຍຸດທະສາດການສັງເຄາະໄລຍະແຂງແລະເຄມີ phosphoramidite.ແຕກຕ່າງຈາກການສັງເຄາະ DNA ທາງດ້ານຊີວະສາດ, ວັດສະດຸໃນການສັງເຄາະ DNA ເຄມີແມ່ນ DMT (4, 4-dimethoxytrityl) ແລະ phosphoramidite ດັດແກ້ deoxyriboxyside, ດັ່ງທີ່ສະແດງໃນຮູບ 1. ການສັງເຄາະ DNA ແມ່ນດໍາເນີນຢູ່ໃນການສະຫນັບສະຫນູນທີ່ແຂງ (ພວກເຮົາສາມາດສະເຫນີຕ່າງໆ.ຖັນການສັງເຄາະ Oligo), ເຊັ່ນ CPG (ແກ້ວ pore ຄວບຄຸມ) ແລະ PS (polystyrene), ແລະການສັງເຄາະທັງຫມົດແມ່ນປະຕິບັດໃນເຄື່ອງສັງເຄາະ DNA/RNA, ເຊິ່ງເປັນອຸປະກອນຕົ້ນຕໍຂອງພວກເຮົາ, ມີຮູບແບບທີ່ແຕກຕ່າງກັນເຊັ່ນ: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 ແລະອື່ນໆ, ທິດທາງການສັງເຄາະແມ່ນຈາກ 3 'ຫາ 5', ແລະ nucleotide ໄດ້ຖືກນໍາສະເຫນີໃຫ້ສະຫນັບສະຫນູນແຂງໂດຍຜ່ານຫນຶ່ງ. ວົງຈອນການສັງເຄາະ.ວົງຈອນການສັງເຄາະໂດຍທົ່ວໄປມີສີ່ຂັ້ນຕອນ, Deprotection, Coupling, Capping ແລະ Oxidation (ຮູບ 2).Deprotection ຖືກກໍານົດທີ່ຈະເອົາກຸ່ມ DMT ເທິງການສະຫນັບສະຫນູນແຂງຫຼືກຸ່ມ 5' hydroxyl ໃນ nucleoside ທີ່ຜ່ານມາ, ອາຊິດ trichloroacetic 3% ໃນ dichloromethane ຖືກນໍາໃຊ້ເປັນສານຕ້ານອະນຸມູນອິສະລະ.ຫຼັງຈາກນັ້ນ, phosphoramidite ດັດແກ້ deoxyriboxyside ໄດ້ຖືກອະນຸຍາດໃຫ້ exposure ກຸ່ມ hydroxyl ດ້ວຍການຊ່ວຍເຫຼືອຂອງ activator, ie 5-ethylthiotetrazole ຫຼື 4, 5-dicyanoimidazole, ກອບເປັນຈໍານວນ phosphitetriester (III), ແລະຮັບຮູ້ຂັ້ນຕອນ Coupling.ຂັ້ນຕອນ Capping ແມ່ນປະຕິບັດເພື່ອສະກັດກຸ່ມ hydroxyl ທີ່ບໍ່ໄດ້ຮັບການປະຕິກິລິຍາໃນລະຫວ່າງຂັ້ນຕອນການເຊື່ອມ, ເພື່ອຫຼຸດຜ່ອນການສ້າງລໍາດັບຄວາມບົກຜ່ອງທີ່ບໍ່ຕ້ອງການ.ສຸດທ້າຍ, phosphitetriester ທີ່ບໍ່ຫມັ້ນຄົງ (III) ຖືກ oxidized ກັບ phosphortriester ຄົງທີ່ທາງເຄມີ (V) ທີ່ມີທາດໄອໂອດິນເປັນ oxidant ໃນປະຈຸບັນຂອງ pyridine.

DNA ທີ່ສັງເຄາະສາມາດຖືກແຍກອອກຈາກການສະຫນັບສະຫນູນທີ່ແຂງໂດຍ aminolysis, ກຸ່ມ 2-cyanoethyl ປ້ອງກັນຢູ່ໃນ phosphortriester ແລະ amide ໃນ nucleobase ຖືກແຍກອອກໃນເວລາດຽວກັນ, ແຜ່ນສັງເຄາະແລະຄໍລໍາສັງເຄາະໃນ racks ແມ່ນຖືກຈັດໃສ່ໂດຍກົງຢູ່ໃນຫ້ອງຕິກິຣິຍາ. ຂອງອຸປະກອນປ້ອງກັນ.DNA ດິບສາມາດໄດ້ຮັບການກະກຽມໂດຍ HPLC, electrophoresis ແລະ OPC ຕາມຄວາມຕ້ອງການ, ພວກເຮົາຍັງສາມາດສະຫນອງທ່ານອຸປະກອນການຊໍາລະລ້າງສໍາລັບຫຼັງການປຸງແຕ່ງ.